Qu'est-ce que la coloration simple? Caractéristiques principales



Le coloration simple C'est une procédure de coloration rapide et simple dans laquelle un seul colorant est utilisé, c'est pourquoi on l'appelle simple. Il est principalement utilisé pour déterminer la morphologie et l'organisation des cellules présentes dans un échantillon.

Naturellement, les cellules n'ont pas de couleur, il est donc nécessaire de les rendre visibles d'une manière quelconque lorsqu'elles sont observées au microscope.

Cellules de joues humaines colorées par simple coloration au bleu de méthylène.

Il est important de souligner que les colorants utilisés dans la coloration simple doivent être basiques avec une charge positive (cationique), de sorte qu'ils puissent se lier spontanément à la paroi cellulaire et au cytoplasme.

Ces structures cellulaires sont chargées négativement. C'est pourquoi le colorant, chargé positivement, est attiré par les cellules et s'y lie spontanément. Ainsi, toutes les cellules présentes dans un échantillon sont rapidement colorées.

Colorants utilisés dans la coloration simple

Il existe plusieurs colorants de base pouvant être utilisés dans le laboratoire de microbiologie. Les plus utilisés sont:

- bleu de méthylène

- cristal violet

- vert malachite

- Fuchsin basique.

Tous ces colorants fonctionnent bien dans les bactéries car ils contiennent des ions colorés (chromophores) chargés positivement (cationiques).

Les temps de coloration de la plupart de ces colorants sont relativement courts. Ils varient généralement de 30 secondes à 2 minutes, en fonction de l'affinité du colorant.

Il est important de garder à l'esprit qu'avant de teindre un échantillon par simple coloration, il faut l'étendre et le fixer sur la lame de verre (diapositive). L'échantillon étendu et fixe s'appelle un frottis.

Les 6 étapes pour effectuer une simple coloration

Étape 1

Placez la lame sur un portoir et appliquez le colorant désiré. Laissez agir le temps correspondant.

Normalement, la coloration simple prend quelques secondes ou quelques minutes, en fonction du colorant utilisé.

Observation

Dans cette étape, il est important de ne pas dépasser le temps recommandé pour le colorant utilisé, car des cristaux pourraient se former sur la feuille, produisant ce que l'on appelle des "artefacts" qui faussent la morphologie des cellules.

Étape 2

Laver soigneusement le frottis de la lame avec de l'eau distillée provenant d'une bouteille ou avec de l'eau du robinet qui coule lentement jusqu'à ce que le ruissellement devienne transparent. Cela prend habituellement 5 à 10 secondes.

Observation

N'appliquez pas le jet d'eau directement sur le frottis pour éviter que la force de celui-ci n'endommage l'échantillon.

Si vous n'avez pas d'eau distillée, vous pouvez utiliser l'eau du robinet sans aucun problème, car cela n'affectera pas le résultat de la coloration.

Étape 3

Séchez la lame avec des essuie-tout absorbants dans un sens et sans frotter. Assurez-vous que le bas de la diapositive est propre.

Étape 4

Observez le frottis coloré sur le microscope. Commencez avec les objectifs les plus éloignés pour localiser correctement la zone que vous souhaitez observer plus en détail. Changement d'objectif pour se rapprocher de l'échantillon.

Observation

Pour utiliser l'objectif avec le plus fort grossissement (normalement 100X), il faut utiliser de l'huile à immersion, car cela aide la lumière à mieux pénétrer et l'image plus nette. Il n'est pas nécessaire d'utiliser une lamelle.

Étape 5

Enfin, jetez tous les échantillons dans un contenant approprié étiqueté correctement «danger biologique».

Références

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  2. Harisha, S. (2006). Une introduction à la biotechnologie pratique (1st). Pare-feu.
  3. Moyes, R. B., Reynolds, J. et Breakwell, D. P. (2009). Coloration préliminaire des bactéries: taches simples. Protocoles actuels en microbiologie, (SUPPL 15), 1-5.
  4. Pommerville, J. (2013). Les bases de la microbiologie du laboratoire d'Alcamo (10e). Jones & Bartlett Learning.
  5. Prescott, H. (2002). Exercices de laboratoire en microbiologie (5 e). Les sociétés McGraw-Hill.
  6. Sumbali, G. et Mehrotra, R. (2009). Principes de Microbiologie (1st). Tata McGraw-Hill Education.